人生小哲理
干细胞者说
科普相当重要
尤其是前沿热点
比如干细胞
正文
路在脚下延伸，每前进一步都距离真理更近一步。
撰文：东海先生
来源：间充质干细胞
分离MSC，是研究和应用MSC的第一步。
培养MSC，是研究和应用MSC的第二步。
大规模体外培养扩增高质量的MSC，是干细胞企业所追求的。那么建立合适的培养体系就显得非常重要，而培养基是重中之重。相信有些干细胞企业都有属于自己的培养基专利，但是拥有专利不等于这个专利能培养出高质量的MSC。培养基配方稍加改动，就可以产生新的专利，而且专利的本质不在于追求培养出高品质的MSC。中草药众多、成份复杂多样化，所以在MSC培养基中添加不同的中药材成份，既可产生很多很多专利（拿走不谢）。
不同的实验或者企业，MSC的培养体系很可能不同。
比如有实验室培养MSC到第9代已经出现80%的衰老（SA-gal染色阳性）[1]，而有的实验室培养到第11代也只是40%的MSC出现衰老[2]。有的实验室骨髓MSC只能扩增到第10代，脐带、脐带血、羊膜来源的MSC也只能扩增到12-14代[3]。但也有实验室能做到脐带MSC的培养能有效扩增到40代，依然具有多向分化潜能[4]。可见不同实验室的培养体系对MSC的扩增效能有明显的差异。
MSC的细胞质量伴随着衰老快速下降（见图）
MSC的体外扩增培养，不可避免地出现复制衰老（replicativesenescence）[1,2,5,6]，过度扩增还可能伴随着基因组的不稳定性[7-9]，影响到MSC的干细胞功能[10]。相对于老鼠的MSC，人MSC的基因组稳定性比较好，而且不具有成瘤性[11-13]。
那么MSC细胞衰老的最直观表现有哪些？增殖速度减慢和胞体变大扁宽是所有细胞衰老的特征[14]。
细胞核型分析显示，骨髓MSC在培养至18代的时候出现了染色体异常和端粒酶缩短[11]，而脐带MSC在培养至30代才会出现染色体异常[13]。但是一般都会应用10代前的MSC，所以不用担心染色体异常的问题。
所以，MSC细胞培养体系很重要！培养基、氧分压和培养载体是三个关键因素。
1.培养基
基础培养有DMEM、DF-12、αMEM、IMDM等。不同基础培养对MSC大规模扩增有没有影响？目前这方面的研究极少。年的一篇文章证明以DMEM为基础的扩增培养基能更好地促进人骨髓MSC在早期传代(P4)中的增殖，但是在P5代后，DMEM就略逊色于αMEM（见下图）[15]。不过，这个培养体系下，只是到P8代，MSC的倍增时间就达到8天，那就说明这个培养体系没法支撑MSC的长期培养，还有优化的空间。
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